導讀：近幾年，MSI在指南共識中的推薦地位不斷上升，MSI檢測結果在指導免疫治療上有很強的特異性。因此，獲取更準確的MSI狀態與患者獲益息息相關，有研究表明不同位點在中國人群中MSI檢出率不同，指南推薦的位點（2B3D NCI Panel）檢出率比沒有指南推薦的位點（6個單核苷酸位點）檢出率高一倍（13.5% VS 6.31%）。本文中，劉東戈教授將為大家溯源為何2B3D是CSCO指南推薦的具有重要意義的MSI檢測位點：

微衛星不穩定性（Microsatellite instability，MSI）現已成為非常重要的泛癌種標志物，美國癌癥研究中心不分腫瘤發生部位，將所有高度微衛星不穩定（MSI-H）的腫瘤定義為MSI-H腫瘤，相比MSS或MSI-L腫瘤，MSI-H腫瘤能夠從免疫治療中顯著獲益。因此，MSI現在最重要的臨床意義就是指導泛癌種實體瘤免疫治療。除此之外，MSI檢測不僅是篩查林奇綜合征的重要手段，其檢測結果還能預測胃腸腫瘤預后，指導術后化療方案制定。

基于MSI的重要臨床檢測意義，中國臨床腫瘤學會發布的CSCO腫瘤診療指南中，多個癌種指南都強烈推薦MSI檢測，包括CSCO結直腸癌診療指南（I級推薦）、CSCO胰腺癌診療指南（I級推薦）、CSCO胃癌診療指南（I級推薦）、CSCO食管癌診療指南（I級推薦）、CSCO卵巢癌診療指南（III級推薦）、CSCO膽道惡性腫瘤診療指南（III級推薦）、CSCO前列腺癌診療指南。

而針對MSI的檢測，CSCO指南唯一推薦的檢測Panel，即由2個單核苷酸位點和3個雙核苷酸位點組成的2B3D NCI Panel（BAT-25、BAT-26、D2S123、D17S250、D5S346），并給出了判定標準：5個位點中2個及2個以上的位點不穩定為MSI-H；1個位點不穩定為MSI-L；所有位點均穩定為MSS。

圖 1 CSCO指南唯一推薦2B3D NCI Panel作為MSI檢測Panel

人類基因組中已知的微衛星位點數目多達1900多萬個[1]，由于前人的不斷篩選和驗證，最終2B3D NCI Panel成為CSCO指南唯一推薦的MSI位點。最早微衛星不穩定這種現象是在遺傳性非息肉性結直腸癌（HNPCC，即林奇綜合征）中被發現，當時Aaltonen教授團隊在HNPCC和散發性結直腸癌的腫瘤組織中都發現一些雙核苷酸重復的微衛星位點長度發生了變化，當時定義為復制錯誤（Replication Errors，RER）也就是后來的MSI，并且研究團隊發現在HNPCC中這種現象的占比高達86%[2]。同一時期，Thibodeau教授團隊研究發現MSI多發于近端結腸且與患者生存期延長呈顯著相關[3]。

圖 2 HNPCC與散發性結直腸癌中均發現RER現象（2）

正因為MSI與HNPCC有非常大的相關性，MSI在早期也被用于篩查HNPCC，美國癌癥研究中心（NCI）成立的針對微衛星不穩定檢測的國際工作小組在1997年底舉辦了國際研討會來總結和統一標準。研討會將RER、MSI、MMP（microsatellite mutation phenotype）等描述微衛星不穩定現象的術語統稱為了MSI，并再次明確MSI的定義：即相比正常細胞，腫瘤細胞中的微衛星位點的重復單元數目改變導致的DNA長度變化。

除此之外，研討會通過回顧總結大量既往針對MSI檢測位點檢測性能評估的研究，最終，統一了以PCR方法檢測2B3D 這5個最具代表性位點的方式來完成MSI檢測并明確了判讀標準，最終形成了第一個針對MSI檢測的國際共識指南——NCI 指南（Bethesda指南）[4]，這也是2B3D NCI Panel的誕生。

圖 3 1997年2B3D NCI Panel的提出與診斷標準制定（4）

2B3D NCI Panel被提出后得到了廣泛推廣和認可。同時，隨著研究者們不斷累積研究數據，人們對MSI的了解也更加深入。法國人類多態性研究中心發現，基于高加索人群和非洲人群數據，單核苷酸位點的MSI檢測靈敏度略高于雙核苷酸位點，并且采用單純由5個單核苷酸位點（BAT25、BAT26、NR21、NR22、NR24）組成的Pentaplex Panel同樣能夠勝任MSI檢測[5]。但值得注意的是，位點的檢測特異性在不同人群中是不一樣的，這個研究中的數據就明確顯示這5個單個苷酸位點在高加索人中的特異性更高，非洲人群中特異性更低，這預示著不同種族的最適檢測Panel可能會不一樣。

圖 4 Pentaplex Panel單苷酸位點數據顯示不同人群的檢測特異性存在差（5）

而后，美國Promega公司將Pentaplex Panel中的NR22位點替換成MONO27，組成了適合歐美人群的5個單核苷酸位點MSI檢測Panel——Promega Panel，并加以推廣。因此，2B3D NCI Panel和Promega Panel逐漸成為MSI檢測的主流，廣泛被國內外眾多研究者使用，是NCCN指南和其他共識中推薦的兩個檢測Panel。同時，眾多免疫檢查點抑制劑的大型臨床試驗也都采用這兩個Panel對MSI進行檢測。

而2B3D NCI Panel從眾多檢測Panel中脫穎而出成為CSCO指南推薦的檢測位點是有原因的。首先2B3D NCI Panel從被提出以來至今，仍被眾多國內外指南共識所推薦，可見其穩定性和可靠性；其次，前文研究結論已經證實，不同檢測位點對不同人群的檢測特異性是不一樣的，所以，檢測性能也會有差異。有大量基于中國人群不同位點的檢測數據顯示，2B3D NCI Panel在中國人群中的檢測性能最高，其次是Promega Panel[1, 6-7]。

表 1 國內既往MSI-H檢出率與檢測位點報道匯總

綜上所述，國內權威CSCO臨床診療指南推薦2B3D NCI Panel作為MSI的檢測位點，不僅因為2B3D NCI Panel是穩定可靠的MSI檢測試劑盒，并且與歐美人群相比可能不同的是，2B3D NCI Panel在中國人群中檢出率更高，可達到13.5%。

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