原料藥質量是藥品質量控制的關鍵和源頭，其中，雜質研究是質量研究的關鍵點，也是難點之一。根據ICH Q3A（R2）指南，藥品雜質分為無機雜質（inorganic impurities)、有機雜質（organic impurities) 和殘留溶劑（residual solvents) 3類。

無機雜質主要是指原料藥制備過程中加入的催化劑、無機鹽、配體、試劑等；有機雜質主要是指起始物料、中間體、副產物等工藝雜質，以及藥物在儲存期間產生的降解產生的揮發性或者非揮發性的雜質；殘留溶劑主要是原料藥合成過程作為載體用于制備溶液或混懸液的液體。

在一定程度上，雜質控制水平反映了藥物質量，那么壓力就給到了原料藥企業。如何在保證原料藥質量的同時，有效控制雜質的含量呢？而且，隨著新藥開發的進程，雜質研究的深度和廣度都在增加，又該如何應對？

5月26日，博騰股份小分子事業部分析研發總監蔣慧娟作了《原料藥分析方法開發思路與案例分享》直播講課，或許從中可以找到答案。

分析方法是為完成各種檢測項目而設定和建立的測試方法，是了解雜質信息的重要手段。根據ICH Q14草案，分析方法開發目的是在可報告范圍內，以規定的專屬性/選擇性、準確度和/或精密度，對分析物的一項或多項屬性進行測定。

《化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則》（2005）中指出，分析方法通常包括：分析方法原理、儀器及儀器參數、試劑、系統適用性實驗、供試品溶液制備、對照品溶液制備、測定、計算及測試結果的報告等。

伴隨新藥開發的進程，原料藥的生產工藝和參數不斷變化，相應的分析方法也要改進，因此就要不斷的進行方法開發和優化，以獲得適用于預期目的的分析方法，由此開啟了分析方法的生命周期閉環。

下圖概述了藥物開發不同階段分析方法的要求。

鑒于此前關于分析方法開發一直沒有權威官方指南，因此CDE在藥物開發不同階段分析方法發布了區域性指導原則。比如在《化學藥品創新藥 I期臨床試驗申請藥學共性問題相關技術要求》中關于質量標準和分析方法的一些共性問題：申報者僅簡單提供質量標準，缺少提供部分關鍵項目的分析方法、未提供關鍵項目分析方法必要的驗證信息。

對此CDE提出的一般性要求為：參照《新藥 I 期臨床試驗申請技術指南》相關要求研究并制定臨床試驗樣品質量標準，以表格形式提供相關檢測項目和可接受限度要求。注意提供關鍵項目（例如有關物質、殘留溶劑、金屬催化劑及金屬試劑殘留、遺傳毒性雜質、溶出度/釋放度、含量等）的具體分析方法，以及必要的方法學確認信息（例如至少包括專屬性、靈敏度等）。

《化學藥品創新上市申請前會議藥學共性問題及相關技術要求》關于原料藥有關物質研究和控制也存在一定的問題：原料藥雜質譜分析不充分；有關物質分析方法檢出能力不足；雜質控制及限度制定依據不充分。

CDE提出的一般性要求為：參照 ICH Q3A 等相關指導原則進行雜質研究，全面分析雜質的來源，進行清除、轉化研究，合理制定控制策略，提供完整的雜質譜研究信息和資料。

應對加速和長期試驗中超過鑒定限的降解雜質進行歸屬研究，關注影響因素試驗條件下降解雜質的研究，增強對降解途徑的理解。如生產工藝發生變更，應分析研究可能產生的新雜質，考察有關物質方法的適用性。

有關物質分析方法應充分驗證，合理選擇雜質定量方法，例如，應評估外標法、加校正因子的自身對照法等定量方法，考慮雜質對照品制備的難易程度和持續提供情況，主成分作為對照的合理性等。

根據 ICH Q3A 等相關指導原則合理設定雜質限度，限度的制定需有動物安全性試驗依據，必要時應重新進行動物安全性試驗。

另外，我們值得補充的一點是，在ICH Q14填補了分析方法開發工具的空白。解析詳情可直接查看《填補空白，ICH發布分析方法開發指南及驗證指南》。

根據ICH Q14，對產品和工藝的理解（ICH Q8和ICH Q11“原料藥開發和生產”），可識別出需要分析檢測以進行控制的質量屬性，這些屬性的描述可見目標產品質量概況（QTPP），檢測需求可記錄在ATP(analytical target profile，分析目標文件）中，構成了分析方法開發的基礎。

ATP包括對預期目的的描述、待測產品屬性的詳細信息以及相關性能特性與相關性能標準，它有助于技術選擇、方法設計和開發以及后續性能監測和分析方法的持續改進。在整個生命周期內對ATP進行維護，也可將其用作生命周期管理的依據，以確保分析方法始終適用于預期用途。

開發特定的分析方法開發過程需要關鍵步驟，首先要確定正在開發的方法類型，確定所開發的方法是用于檢測還是純度、殘留溶劑或粒度等確定。并且還需要確定化合物的性質（活性藥物成分、賦形劑等），以及選擇技術。

對此，蔣總特對原料藥分析開發中檢測項目及其分析方法的實踐作出了如下概述。

原料藥分析方法開發概覽表

分析方法被開發出來后，還需要對該方法進行優化，因為每種分析方法都必須適合其預期用途和階段。完成優化之后，驗證分析方法成為接下來的工作重點，這一步也是API成功的關鍵。本文重點分享博騰制藥在有關物質通用分析方法開發的流程。該流程分為4步，首先完成樣品準備和技術選擇，然后進行方法篩選，之后再進行方法優化，最后對方法進行確認或預驗證。

博騰引入ACD/Labs 預測雜質及API的pKa,  LogD等輔助方法開發。同時根據雜質譜情況，使用包含起始物料、中間體、反應副產物、降解雜質等的樣品用于方法開發。另外粗品和強制降解樣品也會考慮。

此步驟的主要目的是篩選不同的色譜柱、不同pH值的流動相和不同有機溶劑，根據檢測能力及ACD/Labs輔助判斷篩選結果。

初步篩選之后會進行進一步的方法優化，優化參數比如梯度、檢測波長、流速、色譜柱、柱溫、樣品濃度、進樣體積等。同時ACD/Labs 輔助單因素或多因素優化，初步確定最佳色譜條件，大大提高方法優化效率。

初步確定方法之后，需要對方法進行確認或預驗證，具體項目包括專屬性（包括強制降解實驗），LOD&LOQ，方法耐用性等。若需要，再做方法優化，確定最終色譜條件。 

以上流程完成后，會生成原料藥有關物質開發的報告。

原料藥分析方法開發是質量研究中的重點和難點，其需要非常豐富的專業知識，且各國藥監管理局也一直在提高監管要求的標準。總的來說，分析方法開發是一項由多年經驗、經驗教訓和戰略思維磨練出來的技能，并以健全的科學流程為后盾。所以合適且有豐富經驗的CDMO能幫助企業大大縮短從臨床前到商業化的生命周期，為新藥的開發保駕護航。

PS：更多關于原料藥分析方法開發問題探討，歡迎添加博小騰入群交流～ 

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